第一节 生化试剂的概况
生化试剂是指有关生命科学
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的生物材料或有机化合物,以及临床诊断、医学
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用的试剂。生物学的
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已从细胞水平发展到分子水平,可以上说是50年代以来发展最快的学科之一。用生物化学和分子生物学的方法与技术
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生命现象本身,已经应用于生物学的各个领域。生化试剂可以定义为:生命科学中所用的化学试剂。(可行性
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)
第二节 生化试剂作用
1、蛋白酶K:能水解消化蛋白质,特别是与DNA结合的组蛋白,在尿素和SDS中稳定。一般工作浓度是50—100μg/ml,推荐反应缓冲液:50mM Tris-HCl (pH7.5),10mM CaCl2。
2、SDS:十二烷基硫酸钠,溶解细胞膜上的脂类与蛋白质,因而溶解膜蛋白而破坏细胞膜,并解离细胞中的核蛋白,SDS 还能与蛋白质结合而沉淀。
3、IPTG:异丙基-β-D-硫代半乳糖苷, 常用于蓝白斑筛选及IPTG诱导的细菌内的蛋白表达等。IPTG和乳糖的结构相似,所以它和乳糖一样,可以与乳糖操纵元的阻遏蛋白结合,使阻遏蛋白的空间构像变化,四聚体解聚成单体,失去与操纵子特异性结合的能力,从而解除了阻遏蛋白的作用,使其后的基因得以转录合成利用乳糖的酶类。与乳糖不同的是,IPTG不被 β-半乳糖苷酶水解。常与X-GAL一起用于蓝白斑筛选。作用极强的诱导剂,不被细菌代谢而十分稳定。
4、X-gal:5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷,是IPTG的显色试剂,在IPTG的催化下显蓝色。常跟IPTG一起用与蓝白斑筛选。
5、G418:一种抗生素,对几乎所有的细胞都有毒性,是稳定转染最常用的选择试剂。当neo基因被整合进真核细胞基因组合适的地方后,则能启动neo基因编码的序列转录为mRNA,从而获得抗性产物氨基糖苷磷酸转移酶的高效表达,使细胞获得抗性而能在含有G418的选择性培养基中生长。G418的这一选择特性 ,已在基因转移、基因敲除、抗性筛选以及转基因动物等方面得以广泛应用。
6、DMSO:二甲基亚砜。实验室常用于作液体层析溶剂,同时用作测试物质紫外消光值上时用作参照物。能溶于所有烷烃和烯烃。 7、曲拉通X-100:TritonX-100,用的细胞裂解液成分之一,在保护蛋白活性方面有一定作用, 能力介于NP40和SDS之间,偏向于NP40。
8、NP-40:很温和的去垢剂,1%浓度的基本可以破坏掉胞膜,而对核膜破坏的作用弱,结合特定的buffer可以获得胞浆蛋白。 9、BSA:牛血清白蛋白, 主要起维持渗透压作用、PH缓冲作用、载体作用和营养作用。在动物细胞无血清培养中,添加白蛋白可起到生理和机械保护作用和载体作用。常用于蛋白定量中的内参和抗体稀释液。
第三节 生化试剂的种类
(1)免疫试剂包括抗体及抗血清、正常血清及补体、抗原、免疫组织化学
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用试剂、细胞培养用试剂、细胞分离试剂、凝胶内扩散法及电泳试剂等。
(2)基因工程用试剂包括基因表达与基因重组、人工合成蛋白、激素、核酸合成试剂、核酸制剂、内切酶等。
(3)诱变剂和致癌物质主要供测定工作场所与生活环境中的毒物质的致癌性与化学毒物的致突变性。
(4)临床诊断试剂主要供医疗系统中的临床病理诊断、生化诊断、液晶诊断、同位素诊断与一般化学诊断等诊断检查中所用的一大类化学试剂。
(5)工业用化学品包括试制开发的工业用化学品,有四千种以上,还在不断增加。
第四节 生化试剂市场概况
随着2010年《国务院关于加快培育和发展战略性新兴产业的决定》的出台,为我国处于高速发展期的生物产业注入了一针强心剂,大大促进我国生物技术企业的发展速度。
2010年生化试剂商业经营品种约2000种,年销售金额6000万元左右,每年进口的数百万美元化学试剂中有一半以上是生化试剂。按近年市场供需情况推算,国内工业产值约占化学试剂产值的10%,市场供应中进口与国产的比例大致是6-4。另据商业销售情况
分析
,生化试剂市场需求的年递增率在15%以上,其中临床诊断试制盒的销售约占六分之一,是生化试剂各大类品种中销售增幅最快的。
基因工程重组蛋白药物是新药开发的重要发展方向之一。重组蛋白药物虽然仅占全球处方药市场的7-8%,但发展非常迅速,2005年全球销售额已达到410亿美元,几乎是1989年的9倍。血液病、肿瘤、中枢神经系统疾病和感染性疾病(包括艾滋病)药物占据重组蛋白药物市场绝大部分份额。
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